Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中的逐渐扩展

从第一次注意到肾脏自身突变到注意到1标准型癌症医学呕吐的困难重重叛将在青少年时期就有很好的阐述，多个肾脏自身突变无呕吐的青少年中的有70%在肝脏转换后10年内患上癌症，而随访15年的青少年这一数目降低到84%。比起来说之下，占医学1标准型癌症一半以上的标准型1标准型癌症的发作功能还无法得到充分的研究成果。

越来越多的人开始常用依此系统来定义1标准型癌症的困难重重：个形体在注意到多种肾脏自身突变时进入第1阶段，注意到血糖异常时进入第2阶段，注意到呕吐时进入第3阶段。一些多发肾脏自身突变无呕吐的个形体，在1期和2期，困难重重较慢，并演进为发作的1标准型癌症。我们之前阐述了一一组在首次监测到多种肾脏自身突变样本后至多于10年无癌症的近乎慢困难重重者，这一组病人人数多于，但形态非常一致。随后，我们辨认出肾脏自身复合物特异性CD8+T蛋白反其所在困难重重比较慢的病人中的基本不依赖于，但在近期发作和长年依赖于的癌症病人中的很容易监测到。这可能说明了，与困难重重病人比起来说，这些病人免疫性反其所的恒定增强。

早期研究成果说明了，尽管恒定性T蛋白(Treg)数量短时间，但癌症病人依赖于一些功能毛病，其中的以外对IL-2的反其所能力降低。此外，癌症病人中的的效其所CD4+T蛋白可能对恒定不具抵抗性，表现为效其所T蛋白的诱发减弱，自然激发的Treg和形体外激发的诱导Treg，以及复合物境况的CD4+T蛋白中的IL-2反其所减弱。本研究成果的目地是阐述了CD4+恒定性T蛋白(Treg)在一小群近乎比较慢困难重重者中的的形态，他们的半数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁请注意确诊的病人亲属中的心理健康检查1标准型癌症的危险因素。我们之前阐述了长年比较慢困难重重者的形态，他们保持多重肾脏自身突变无呕吐超过10年，但无法注意到癌症的医学呕吐，慢性或非展开性免疫性。随后，10名一直保持无癌症并想要共享大量血液样本的比较慢困难重重者纳入T和B蛋白功能分析。在目前的研究成果中的，8名慢困难重重者(SP一组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的肾脏自身突变无呕吐。所有的举例来说都东南面1标准型癌症困难重重的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身突变对某些复合物的无呕吐反其所，然而，一名病人之前东南面2期至多于6年，但无法注意到医学呕吐，一名病人被临床为癌症，该受试者72岁，在捕获实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中的对该NADPH展开了单独评估。分立外周血单个核能蛋白(PBMCs)，采用多参数流式蛋白术和T蛋白诱发试验评估NADPH中的Treg的频叛将、表标准型和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)展开无都由聚类分析，评估Treg表标准型。

结果：与心理健康NADPH比起来说，来自慢困难重重形体的无意识CD4+T蛋白的都由聚类说明了，激来生的无意识CD4+ Treg频叛将降低，与持续性诱导的TNFR相关蛋白(GITR)传达降低有关。一名HbA1c升高的病人与困难重重比较慢者和也就是说的对照一组比起来说，Treg可知有所不同。功能相比较，与心理健康NADPH比起来说，来自比较慢困难重重形体的Treg内源性的CD4+效其所T蛋白诱发明显受损。表现为对效其所CD4+T蛋白CD25和CD134传达的诱发降低。

示意图1 深入的表标准型分析说明了，CD4+Treg冠状病毒在慢困难重重缓冲区中的降低。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有NADPH的来生CD4+CD45RA -蛋白上。根据标明物传达鉴定出10个元簇:无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)常用9个不同Treg标明作用于的10个元簇的MST。每个链表代表一个战略性(100个战略性)，更多的元战略性(10个元战略性)在链表一组四周上色。每个链表中的的饼示意图声称单个标明的传达级别。(b)每个元聚类的热示意图，以说明了整形体标明传达。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)作用于示意图，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起总质量为每个metacluster箱新线示意图(总质量> 0.05%)确定为HD和SP一组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白(l)。深蓝色格子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选标明秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 常用CITRUS的预测模标准型证明，Treg频叛将的降低是困难重重比较慢的图案。分级旁路(a - f)和水果分析(g-k)比较SP举例来说和也就是说的HD举例来说在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的民族特色示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达展开分立，模拟FlowSOM群形体。(b) HD(白点)和SP(白点)一组以及NADPHSP 606(深蓝色)中的CD25+ cd127的频叛将汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路开集的箱新线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，斜线突出的簇被标记为SP和HD缓冲区中间的不同。(j)箱新线示意图说明了了在SP(白点)和HD(灰点)一组中的，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的比起总质量(数目)。(k)直方示意图说明了每个簇的表标准型(紫色)和Treg标明比起传达与故事情节传达(浅蓝色);上列，存储器Treg_3;后面一行，存储器Treg_4。故事情节与所有其他簇中的标明的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选标明秩检验

示意图3 与心理健康献血者比起来说，困难重重比较慢者无意识treg的GITR降低。每个无意识CD4+T蛋白元簇(无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个传达标明的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的传达热示意图(sp606不以外在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中的所有HD(红色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR传达一组合成，说明了直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon筛选标明秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有NADPH以外，p< 0.05(浅蓝色)NADPHSP 606和也就是说的HD不以外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR传达，从分级旁路，从所有HD(红色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(深蓝色)一组合成，说明了直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选标明秩检验

示意图4 来自比较慢困难重重的CD4+ treg蛋白控制效其所CD4+T蛋白的能力降低。SP一组用浅蓝色的新线和格子声称，HD一组用紫色的新线和格子声称，深蓝色的新线/格子声称NADPHsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白展开分选。CD4+CD25−(其所答者)被标明为CFSE, Treg按观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠还原蛋白，培训3天内展开流式蛋白术监测。(a-d)与CD4+其所答者比起其所的treg培训(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD其所答者培训。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE诱发百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百份。常用无呕吐对照(激来生的响其所蛋白都有treg)计算诱发百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 效其所CD4+T蛋白对比较慢困难重重的T蛋白还原的诱发更适合于。SP一组用浅蓝色的新线和格子声称，HD一组用紫色的新线和格子声称，深蓝色的新线/格子声称NADPHsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白展开分选。CD4+CD25−(其所答者)被cfsel标明，treg按观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠还原蛋白，培训3天内展开流式蛋白术(CD25反染)和蛋白因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606其所答者合作培训。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE诱发百分叛将(b)。(c,d) CD25诱发百分叛将(c)和CD134诱发百分叛将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中的的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自比较慢困难重重子的还原无意识CD4+Treg在GITR传达中的得到了适配和丰富，强调了进一步研究成果Treg在1标准型癌症风险个形体中的的异质性的前提。

中文翻译中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28